专利申请技术交底书：化合物类专利申请模板  （以中国发明专利申请CN 112574199 A为例进行说明）

备注：一份好的专利申请技术交底书有助于代理人撰写高质量的专利申请文件，从而获得更好的授权前景和保护范围。

专利申请主题名称（必填）：

专利申请类型（必填）：  ¨发明    ¨实用新型    ¨发明和实用新型同时申请

专利申请技术联系人：张三   电话：12345678901     Email:123456789@qq.com

一、背景技术

1、与本专利申请有关的大背景技术简述（只需要描述与本专利申请相关的内容）

   1）写明对发明或者实用新型的理解、检索、审查有用的背景技术，并且尽可能引证反映这些背景技术的文件；

Example:

RAS蛋白是一类与GTP/GDP结合并具有GTP水解酶活性的小G蛋白。作为分子开关 ,RAS通过结合GTP而激活下游MAPK及PI3K‑AKT等信号通路 , 从而调控细胞生长、增殖、分化和凋亡等生命过程 , 其突变与癌症发生发展密切相关。其有三个家族成员: HRAS、 KRAS和NRAS。KRAS突变是RAS家族中最常见的突变类型。 KRAS突变将导致其丧失GTP水解酶活性 ,从而持续激活下游信号通路 , 促使细胞增殖失控而癌变; 同时 ,KRAS突变是肿瘤细胞的维持生长增殖所必需条件 , 也是肿瘤获得性耐药的关键原因之一。据统计 , RAS突变频率最高的5种癌症分别是胰腺导管腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、肺癌和皮肤黑色素瘤。肺癌中，肺腺癌的32％中可见RAS基因的突变，其中KRAS突变占96％。KRAS突变有多种类型，其中最常见的突变之一是G12C突变 , 在非小细胞肺癌中发生的比例约为14%，在结肠癌中的比例约为4%，在胰腺癌中的比例约为2 .9%。近年来，针对G12C突变KRAS，在被称为开关II的区域附近显示出变构口袋的存在(Nature ,503 ,548 ,2013)，并且报道了通过与突变半胱氨酸形成共价键而不可逆地与G12C突变KRAS结合的 化合物 (Na ture ,503 ,548 ,2013 、Angew .Chem .,Int.Ed .Engl .,53 ,199,2014、CancerDiscov.,6 ,316 ,2016)。G12C突变KRAS选择性抑制剂通过与G12C突变KRAS形成共价键来抑制从非活性型向活性型的转变、切断下游信号，由此诱导癌细胞死亡。

   2）尤其要引证与发明或者实用新型专利申请最接近的现有技术文件；

Example:

到 目 前 为 止 ，已 报 道 了 多 种 选 择 性 靶 向 K R A S ‑ G 1 2 C 的 小 分 子 抑 制 剂（WO2015054572、WO2017201161、WO2018217651、WO2019051291等），其中有部分候选药物（AMG510，MRTX849等）处于临床试验研究阶段，但此类分子的活性和药代动力学性能均有较大改进空间。本领域研究人员的技术诉求是：1）不断优化化合物分子结构，旨在提高化合物的活性和靶向性，减少药物的使用量，从而降低毒副作用；2）通过优化化合物的结构，得到药代动力学更为优异的化合物。

   3）引证专利申请文件的，要写明国别和公开号；引证非专利申请文件的，要写明文件的标题和详细出处；

  4）切忌采用诽谤性语言。

2、客观指出最接近的现有技术的缺点（该缺点是通过本专利申请能够解决或改善的一个或多个缺点）

  1）客观地指出背景技术中存在的问题和缺点，仅限于涉及由发明或者实用新型的技术方案所解决的问题和缺点。

Example:

在相关专利申请中（WO2019051291A1）的化合物分子中吡啶2位的基团的最优选择为异丙基等未取代烷基。在其他的一些专利中（WO2019213516A1）引入了氨基、烷氧基、卤素等各类取代基团，这些化合物要么存在活性不高，要么存在半衰期过短或血药浓度不高等缺陷。

二、本专利申请技术

具体方案（重点描述本专利的技术方案：与现有技术对比，本专利申请的差别以及如何通过这些差别来实现客观改进的效果）

1、 化合物通式结构专利申请中，通式结构上各取代基的定义，优选取代基。

Example:

本发明提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，

R1选自三氟甲基或二氟甲基；R2选自‑NH2或‑OH。

2、具体化合物结构的列举

Example:

3、通式化合物结构的制备工艺

Example:

在合成工艺中，原料1和原料2进行缩合反应得到中间体3，中间体3在碱作用下发生分子内关环反应得到中间体4，接着三氯氧磷氯代得到中间体5。中间体5与化合物6进行SN2反应得到中间体7 ,接着经过钯催化的偶联反应接上芳香化合物8得到中间体9，中间体9脱去保户基后与烯酸酰氯发生缩合反应得到化合物10。

3、本专利申请的关键点和欲保护点

四、与现有技术相比，本专利申请的优点：

与现有技术的方式相比，本专利申请具有以下至少一种优点：

与现有结构最接近的化合物相比，本专利申请化合物的优点

Example:

本发明实施例提供了一类以KRAS‑G12C为靶点的新型含氟杂环小分子化合物，有着出乎意料的优异活性和药代动力学性能，能够用于治疗肿瘤疾病如肺癌、结直肠癌、胰腺癌等。这类衍生物不仅能够提高这类化合物活性，还能够有效地延长化合物的半衰期以及提高血药浓度等。

五、其他有助于理解本专利申请的技术资料

六、具体实施方式具体例子参考如下，并给出这些制剂的制备方法，。

4、具体化合物的合成实例以及中间化合物和目标化合物的鉴定数据

实施例 1

步骤S1: 4‑((S)‑4‑丙烯酰‑2‑甲基哌嗪‑1‑基)‑1‑[2‑(2 ,2‑二氟环丙基)‑4‑甲基吡啶‑3‑基]‑6‑氟‑7‑(2‑氟‑6‑羟基苯基)吡啶[2,3‑d]嘧啶‑2(1H)‑酮步骤A：1‑甲基‑2‑硝基‑3‑乙烯基吡啶在氮气保护下，将2‑溴‑3‑硝基‑4‑甲基吡啶（1 g）、Pd(dppf)Cl（337 2 mg）、碳酸钾（2 g）、乙烯三氟硼酸钾（0 .94 g）溶于1 ,4‑二氧六环/水（35 mL/5 mL）混合溶剂中，将体系升温至120℃搅拌过夜。冷却至室温，减压浓缩，残留物加入乙酸乙酯溶解，垫硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（603 m g）。

步骤S2：2‑(2,2‑二氟环丙基)‑4‑甲基‑3‑硝基吡啶在氮气保护下，向装有四氢呋喃（3 ml）的封管中依次加入1‑甲基‑2‑硝基‑3‑乙烯基吡啶（100mg）、NaI（99 mg）、三乙基(三氟甲基)硅烷（170 mg），封闭封管，随后升温至70℃搅拌过夜。冷却至室温，垫硅藻土过滤，减压旋干溶剂，残留物经硅胶制备板（EtOAc/PE =1/2）分离得到产物（27 mg）。

1H NMR (400 MHz , CDCl3) , 8.49 (d, J = 5.2 Hz , 1H), 7.17 (d, J = 5.2Hz , 1H), 2.84‑2 .92 (m, 1H) , 2 .43‑2.52 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 1.80‑1.89 (m,1H)

步骤S3……

步骤S4……

步骤S5……

……

步骤Sn

在0℃下，向1‑(2‑(2 ,2‑二氟环丙基)‑4‑甲基吡啶‑3‑基)‑6‑氟‑7‑(2‑氟‑6‑羟基苯基)‑4‑((S)‑2‑甲基哌嗪‑1‑基)吡啶[2 ,3‑d]嘧啶‑2(1H)‑酮（25 mg）的DCM（3 mL）溶液中，依次加入DIEA（22 mg）、丙烯酰氯（2 .2 mg），0℃搅拌15分钟。加入饱和碳酸氢钠水溶液（5 mL）淬灭反应，DCM（10 mL）萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EtOAc/PE = 3/1）纯化得到产物（8 mg）。

[0055] ¹H NMR (400 MHz , CDCl₃) , 9.37 (s , 1H) , 8.54 (d , J = 4 .8 Hz , 1H) , 7 .88‑7 .92 (m , 1H) , 7 .26‑7 .31 (m , 2H) , 6 .50‑6 .72 (m , 3H) , 6 .39 (d , J = 16 .8 Hz ,1H) , 5 .80 (d , J = 10 .8 Hz , 1H) , 5 .17‑5 .30 (m , 0 .3H) , 4 .62‑5 .03 (m , 1 .7H) ,4 .34‑4 .59 (m , 1H) , 3 .94‑4 .28 (m , 1H) , 3 .76‑3 .93 (m , 1H) , 3 .41‑3 .75 (m , 2H) ,2 .87‑3 .31 (m , 1H) , 2 .25‑2 .46 (m , 1H) , 2 .14 (s , 1 .5H) , 2 .13 (s , 1 .5H) , 1 .42‑1 .70 (m , 4H)。

合成实例必须足够多，多到能够得出前述通式化合物

例如：某一取代基包含C₁~C₆烷基、C₂~C₆烯基、C₂~C₆炔基、C₁~C₆烷氧羰基、卤素、C₃~C₇环烷基、C₃~C₇环烯基等

那么实施例要求有取代基是烷基，炔基，环烯基的例子，除非该取代基已经在现有技术中有合成实例以及效果验证数据

6、各化合物的活性验证过程以及数据（包括对比数据）。

人非小细胞肺癌细胞系NCI‑H358细胞（购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心）使用RPMI‑1640培养基加10%的胎牛血清(FBS，购自Biological Industries，BI)和1%青霉素/链霉素(P/S，购自Thermo Fisher Scientific)进行培养，培养条件为37°C，5%CO2。将NCI‑H358细胞以2000个细胞/195μL/孔的浓度铺于96孔板(#3917，购自CORNING)中。24小时后将化合物从10 mM开始用100% DMSO进行 3倍的梯度稀释混匀(共10个浓度)，然后每个浓度取2 μL的化合物加入到48 μL的RPMI‑1640培养基中进行稀释混匀。稀释后的化合物每个浓度取5μL加入铺好的细胞悬液中，将化合物与细胞在细胞培养箱中共孵育120小时(5天)。之后去除培养基后加入25 μL的Cell‑Titer Glo ® (G7570，购自Promega)试剂，室温摇床反应5‑ 10分钟。在Envision上读取化学发光值，数据使用GraphPad Prism软件进行处理，计算得到该化合物对细胞增殖抑制的IC50值。

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